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原代細(xì)胞培養(yǎng)體系配置方法
發(fā)布時(shí)間： 2023-03-07 點(diǎn)擊次數(shù)： 3927次原代代培養(yǎng)體系一般由以下四種 (三種) 組成：
名稱
體積
保存條件
基礎(chǔ)培養(yǎng)基
500ml
4℃、避光
添加劑
5ml
-20℃、避光
胎牛血清 (FBS)
0-50ml
-20℃、避光
雙抗 (青霉素/鏈霉素，P/S)
5ml
-20℃、避光
添加劑和雙抗通常濃度為 100X(100 倍工作濃度)。血清的添加比例有 0%(不添加)，1%(5ml)， 2% (10ml)，5% (25ml)，10% (50ml) 幾種。
第一次使用時(shí)先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS 轉(zhuǎn)移到 4℃溶解后，在滅菌后的百級(jí)潔凈 等級(jí)環(huán)境中操作，所使用的容器和移液耗材均需要進(jìn)行過無菌處理。
首先將解凍的 FBS、添加劑和雙抗進(jìn)行分裝，平均分裝成 5- 10 份，留下本次配制所需要的量， 剩余的繼續(xù)放回-20℃保存，之后按需取用融化后配制培養(yǎng)基，避免反復(fù)凍融。
建議用無菌的 50ml 離心管盛裝配置好的培養(yǎng)基。
配制方法：在每個(gè) 50ml 離心管中加入①500ul 添加劑、②500ul 雙抗、③50×血清百分比 ml 的胎牛血清、④ (50× (1-血清百分比) - 1) ml 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。配制完成后蓋上蓋子， 顛倒混勻備用。
例如：在血清比例為 5%的條件下，50ml 離心管中各組分的體積分別為：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：(50× (1-5%) - 1) =46.5ml+添加劑：500ul +雙抗：500ul+血清：50×5%=2.5ml
配置好的培養(yǎng)基置于 4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白，易發(fā)生降解，故配置好的培養(yǎng)基有效期僅為 3-4 周，請(qǐng)盡快使用。因此建議每次配制 1-2 管 (50- 100ml)，當(dāng)然 使用量大的情況下也可以適量增加配置量。
P.S. ：不建議客戶將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎(chǔ)培養(yǎng)中混勻使用，原因如下： 1.500ml 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積較大，灌裝時(shí)體積波動(dòng)很大，直接加入，無法準(zhǔn)確地控制因子 和血清的工作濃度。
2. 配制好的培養(yǎng)基僅能在 4℃保存 3-4 周，如果期間沒用完，繼續(xù)使用會(huì)影響培養(yǎng)效果。 如果是-20℃保存，可以延長(zhǎng)保存時(shí)間，但是反復(fù)凍融也會(huì)影響培養(yǎng)基的效果。
3. 如果使用培養(yǎng)基時(shí)由于操作失誤導(dǎo)致污染，分裝能減少培養(yǎng)基的損失量。
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